Abstract

In una recente indagine epidemiologica condotta in Sardegna e pubblicata nel 2010, lo Streptococcus uberis risulta essere il primo agente eziologico isolato dal latte in quadri di mastite infettiva negli ovini. L’Elettroforesi Bidimensionale è una tecnica di separazione su gel di acrilammide che consente di processare centinaia di proteine per volta, è tra le metodiche più frequentemente adottate per semplicità di esecuzione, costo ridotto ed informazioni ottenibili. La tecnica sfrutta la duplice separazione di miscele complesse di proteine: nella prima dimensione la migrazione delle proteine avviene in funzione del loro punto isoelettrico, nella seconda dimensione avviene in base al peso molecolare. Tramite isoelettrofocalizzazione i composti anfoteri, come aminoacidi e peptidi, vengono separati in un campo elettrico lungo il quale viene stabilito un gradiente di potenziale e di pH, stabili. Gli estremi di pH vengono scelti sulla base dei punti isoelettrici dei componenti da separare. Le proteine possono successivamente essere visualizzate con diversi protocolli di colorazione (blu Coomassie, colorazione argentica, fluorocromi o composti radiomarcati). Il risultato è una mappa di macchie o spot che possono essere ulteriormente separati, identificati e caratterizzati dopo il loro trasferimento su supporto solido per essere identificate mediante anticorpi specifici (Western Blotting) o per essere ulteriormente caratterizzate in seguito a digestione con enzimi proteolitici (es. spettrometria di massa MALDI-TOF).

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